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      R-RVC 病毒總RNA快提試劑盒

GalaxyBio Code包裝規格價格說明書購物車
RN15050680元
RN1602502800元

R-RVC 病毒總RNA快提試劑盒

R-RVC
病毒總RNA提試劑盒
試劑盒內容
50
Cat:RN150
250
Cat: RN160
Miniprep column
50
50×5
2 ml microfuge tube
50
50×5
溶液RN1 Buffer RN1
25 ml
25 ml×5
溶液RN2  Buffer RN2
15 ml
15 ml×5
RNA Carrier
350ul ml
350ul×5
溶液RW1 Buffer RW1
15 ml
15 ml×5
溶液RW2  Buffer RW2
15 ml
15 ml×5
溶液TE   Buffer TE
10 ml
10 ml×3
說明書     Protocol
1
1
 
貯存條件:
RNA Carrier -20℃保存,其他室溫或4℃,有效期2年。
產品簡介:     
※  GalaxyBio 公司與美國公司通力合作,由美方提供全方面技術、關鍵純化材料,將核酸純化等系列產品,在國內推廣,實現了進口產品本土化生產。每種產品通過嚴格的技術把關,已達到進口產品的品質,而價格上卻是國產試劑盒的價位
※  采用獨特的組織細胞裂解沉淀技術,快速、方便,高得率、高純度。
  ※  提取的RNA分子完整、純度高,適用于Northern Blot 、RT-PCR、體外翻譯、Primer Extension、RNase保護測定、構建cDNA文庫等各種分子生物學實驗。
注意事項:
1. 所有試劑用DEPC處理過的溶劑配制。請選用RNase-free槍頭和離心管,以避免提取過程中RNA被RNase降解。
2. 試劑含刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套和眼鏡,避免沾染皮膚、眼睛和衣服,謹防吸入口鼻。若沾染皮膚、眼睛時,要立即用大量清水和生理鹽水沖洗,必要時尋求醫療咨詢。
3.試驗中需要異丙醇和乙醇,請提前準備RNase-free的異丙醇和乙醇。
操作步驟:
1.試驗前準備及注意事項
試劑盒在第一次使用前請按試劑瓶標簽說明在溶液RW1 溶液RW2中加入無水乙醇,并做好標記;溶液使用后,避免長期暴露于空氣中,用后請及時蓋緊蓋子,密閉保存。
2.樣品處理
1)液體標本: 血清、血漿、腦脊髓液、分泌液、唾液、腹水、液體糞便、其他分泌物等,12,000×g離心5min,取上清約300ul體積的樣品,加入400 μl Buffer RN1,再加入300 μl Buffer RN2用吸頭抽吸,混合均勻,
冰浴5 min。(樣品較少時,Buffer RN1和RN2按比例同時縮小;也可同時增大) 。
 
2)液體標本濃縮處理:適合病毒拷貝少的標本
取適當體積的液體標本,加入同體積的異丙醇,12,000×g離心10 min,盡量棄去上清。加入400μl Buffer RN1,用吸頭抽吸,混合均勻,冰浴5 min。
3)眼、鼻、喉等拭樣:
   a.將拭樣轉移到離心管中,加入2 ml PBS (或生理鹽水,用戶自備),4℃浸泡2~5h;
b.入同體積的異丙醇,12,000×g離心10 min,盡量棄去上清
c.入400μl Buffer RN1,用吸頭抽吸,混合均勻, 冰浴5 min.
4)從培養貼壁細胞中提取病毒RNA:盡量倒掉培養上清后,不須消化,直接加入Buffer RN1體積按10cm2/ml比例加入。
5)從懸浮細胞中提取病毒RNA:可直接離心收集細胞,每400ul Buffer RN1可裂解5×106動物、植物或酵母細胞,或107細菌細胞
3. 12,000×g 離心10 min。
* 4℃條件下離心。
4. 取上清至1.5 ml離心管中,每140ul加入1ul RNA Carrier 。加入0.6體積的異丙醇(或加入1體積無水乙醇),混合均勻。
步驟5-9可選擇硅膠膜吸附法離心沉淀法:
* 硅膠膜吸附法與離心沉淀法相比,前者更純凈,而后者提取量大,如病毒拷貝較少時,可采用后者。
A. 硅膠膜吸附法
5A. 將制備管置于2 ml (試劑盒內提供) 離心管中,轉移步驟4中的混合液到制備管中,6,000×g離心1min。
* 4℃條件下離心。
6A. 棄濾液,將制備管棄濾液,將制備管置回到2 ml離心管中,制備管中加入700 μl Buffer RW1,12,000×g離心1 min。
* 確認在Buffer中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。
7A. 棄濾液,將制備管置回到2 ml離心管中,在制備管中加入700 μl Buffer RW2,12,000×g離心1 min;以同樣的方法再用700 μl Buffer RW2洗滌一次。
* 確認在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。
8A. 棄濾液,將制備管置回到2 ml離心管中,12,000×g離心1 min。
9A. 將制備管放入干凈RNase-free的1.5 ml離心管中,在制備管膜中央加60-100 μl Buffer RTE (DNase﹠RNase-free) 。室溫靜置1 min,12,000×g離心1 min,洗脫得RNA
B. 離心沉淀法
5B. 12,000×g離心10 min,盡量棄去上清。
6B. 加入700 μl Buffer RW1,2,000×g離心5 min。
* 確認在Buffer Buffer RW1中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。
7B. 棄去管中溶液,加入700 μl Buffer RW2;2,000×g離心5 min。
* 確認在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。
8B. 棄去管中溶液,自然干燥。
9B. 加入10-50 μlBuffer TE (DNase﹠RNase-free) ,溶解RNA。
 
 
 
 
 
RNA定量及純度檢測
總RNA 的定量和定性分析: 所有標本均經紫外分光光度儀檢測所提取總RNA 的濃度及純度,OD260/OD280 的值為1.7~ 2.0。

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