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      EZ-BDC 血液基因組DNA小量快提試劑盒------20分鐘快提DNA

GalaxyBio Code包裝規格價格說明書購物車
GM81050480元
GM8202502000元

EZ-BDC 血液基因組DNA小量快提試劑盒------20分鐘快提DNA

EZ-BDC
血液基因組DNA小量快提試劑盒

試劑盒內容
50
Cat:GM810
250
Cat: GM820
Miniprep column
50
250
2 ml microfuge tube
50
250
溶液AP1 Buffer AP1
25 ml
130 ml
溶液AP2 Buffer AP2
6 ml
30 ml
溶液W1A Buffer W1A
15 ml
30ml×2
溶液W2 Buffer W2
15 ml
30ml ×2
溶液TE   Buffer TE
10 ml
10 ml×5
說明書     Protocol
1
1

 
貯存條件:
室溫,有效期2年。
產品簡介:     
※  GalaxyBio 公司與美國公司通力合作,由美方提供全方面技術、關鍵純化材料,將核酸純化等系列產品,在國內推廣,實現了進口產品本土化生產。每種產品通過嚴格的技術把關,已達到進口產品的品質,而價格卻是國產試劑盒的價位
※  采用獨特的細胞裂解和血紅素/蛋白沉淀技術,快速、方便,高得率、高純度。可從100μl-250μl的血液中快速提取12μg高質量的基因組DNA。
  ※  提取的DNA可直接用于PCR/Real time PCR、限制性酶切、Southern blot、測序、mutant analysis和SNP等下游應用實驗。
注意事項:
1. 如果從鳥類、兩棲類或更低級的動物中提取基因組DNA,因其血液中紅細胞有核,血液用量勿超過10μl,并加PBS 溶液將血樣體積稀釋到250μl后再按正常步驟操作。
2. 制備管可結合多至25μg 的DNA。若需更多的DNA,可用0.5 ml 血來提取基因組DNA。將0.5 ml血樣分成兩管,每管250μl,按步驟1至4制備提取。將步驟4 所得到的上清混合,加到同一個制備管中結合DNA,最后用100-200μl 的Buffer TE洗脫DNA。
3. Buffer AP1 和Buffer W1A 含刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套和眼鏡,避免沾染皮膚、眼睛和衣服,謹防吸入口鼻。若沾染皮膚、眼睛時,要立即用大量清水和生理鹽水沖洗,必要時尋求醫療咨詢。
操作步驟:
1.試驗前準備及注意事項
 a. 試劑盒在第一次使用前請按試劑瓶標簽說明在溶液W1A 溶液W2中加入無水乙醇,并做好標記;溶液使用后,避免長期暴露于空氣中,用后請及時蓋緊蓋子,密閉保存。
   
 b. 使用前,請將水浴鍋調整至70℃,并將溶液TE置于70℃預熱。
2. 加500 μl Buffer AP1 到1.5 ml 離心管中。
3. 加200-250 μl 抗凝全血到Buffer AP1 中,用移液器來回吸注幾次,以徹底溶解殘留在吸頭上的血液。蓋緊離心管蓋子,旋渦振蕩10seconds。
* 必須充分混合或旋渦振蕩以確保完全釋放基因組DNA。
* 若從凝固的血或干血粉中提取基因組DNA,在研缽中收集凝固的血或干血粉,加入200 μl 含20 mM Tris,10 mMEDTA,(pH 8.5)的緩沖液,快速研磨30 s。加500 μl Buffer AP1,研磨充分后收集溶解產物到1.5 ml 離心管中, 50℃加熱1 min。旋渦振蕩溶解可能存在的血塊,在冰浴中冷卻后進入步驟3 的操作。
4. 加100 μl Buffer AP2,旋渦振蕩10seconds。12,000×g 離心10 min。
5. 將制備管置于2 ml 離心管中,將步驟4中的上清加入到制備管中,12,000×g 離心1 min。
* 如在制備管中仍殘留溶液,適當升高離心速度,再離心一次,使所有溶液過濾到2 ml 離心管中。
6. 棄濾液,將制備管置回到原2 ml 離心管中,加入700 μl Buffer W1A,室溫放置2 min12,000×g 離心30seconds。
* 確認在Buffer W1A 中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。
* 如在制備管中仍殘留溶液,適當升高離心速度,再離心一次,使所有溶液過濾到2 ml 離心管中。
7. 棄濾液,將制備管置回到原2 ml 離心管中,加入800 μl 已加無水乙醇的Buffer W2,12,000×g,離心1 min。
* 確認在Buffer W2 中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。
8.(可選方案)將制備管置回到原2 ml 離心管中,加入500 μl Buffer W2 到制備管中,12,000×g,離心1 min。
9. 將棄濾液,將制備管置回原2 ml 離心管,12,000×g 離心1 min。
10.向硅膠膜中央加入80-200µl預熱(70℃)Buffer TE,室溫靜置1 min(放入70℃水浴鍋孵育5分鐘,能夠更好的洗脫),12,000×g 離心1 min 洗脫DNA。更大分子的基因組DNA完全溶解通常需更長時間。提取的基因組DNA可立即進行下游分子實驗或-20℃保存
DNA定量及純度檢測
OD260值為1,相當于50ug/ml的雙鏈DNA。也可以通過DNA Marker通過瓊脂糖凝膠電泳半定量。OD260/ OD280比值一般為1.7-1.8,如果洗脫時不使用緩沖液,而使用去離子水,由于受PH值和離子濃度的影響,比值會偏低。
常見問題
 
可能原因
解決方法
未得到DNA
溶液W1A和溶液W2使用前未加入無水乙醇
請按試劑瓶標簽說明在溶液W1A和溶液W2中加入無水乙醇,并標記。
DNA產量低
 
 
裂解不完全
加入全血后請立即充分混勻。
確保初始血液用量。
確保旋渦振蕩充分。
血液樣品中白細胞濃度較低
 
將血液樣品4,000rpm室溫離心10分鐘。離心后樣品將分為三層,直接吸取20-50μl中間層作為初始材料進行操作。
初始材料質量不高
使用新鮮或冷凍的血液樣品。
洗脫緩沖液使用不當
使用70℃預熱的洗脫緩沖液。
柱子堵塞
過濾出去凝血塊,
有核細胞多,降低使用血量
酶反應性不好
殘留鹽分
Buffer W1A和Buffer W2充分洗滌

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