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      瓊脂糖凝膠小片段DNA小量回收試劑盒

GalaxyBio Code包裝規格價格說明書購物車
FR05050tests260元
FR060100tests480元

瓊脂糖凝膠小片段DNA小量回收試劑盒

 
瓊脂糖凝膠小片段DNA
小量回收試劑盒
         (樹脂·離心柱型)
 
 
 

試劑盒內容
50 貨號cat:FG030
100次貨號cat:FG040
樹脂溶膠液    Matrix-Gel-lysis
35 ml
70 ml
漂洗緩沖液    Wash Buffer
15 ml
30 ml
洗脫緩沖液    Elution Buffer
15 ml
15 ml
吸附柱        Spin Column
50
100
收集管   Collection Tube(2ml)  
50
100
說明書     Specification
1
1

 
貯存條件:
室溫,有效期一年。
產品簡介
     
※  GalaxyBio公司與由美國公司通力合作,由美方公司提供全方面技術、關鍵純化材料,將核酸純化等系列產品,在國內推廣,實現了進口產品本土化生產。每種產品通過嚴格的技術把關,已達到進口產品的品質,而價格上卻是國產試劑盒的價位。
※  目的DNA帶從凝膠上切下來后,通過溶膠液溶膠,樹脂吸附柱吸附,DNA便可用去離子水(或低鹽緩沖液)洗脫出。能從各個等級的瓊脂糖凝膠中回收到20bp-40kp的DNA帶,且回收率達85%,在低濃度凝膠可達95%。
※  回收片斷范圍較廣,特別是對于小于100bp的片斷,優于硅膠膜。
※  標準量的樹脂,最大吸附量為60ug,實驗結果可重復性好。
  ※  純度好, 直接可以用于酶切、轉化、PCR、體外轉錄、測序等各種分子生物學實驗。
 
操作步驟:
1. 試驗前準備及注意事項
 Wash Buffer 使用前請按標簽加入無水乙醇并標示。
2. 切膠  將瓊脂糖凝膠電泳后的單一目的片段切出(盡量切除多余部分),放入1.5 ml滅菌離心管中,稱其重量。
3. 溶膠 用力振蕩樹脂溶膠液,使得樹脂完全懸浮。加入6倍體積(體積比,0.1 g凝膠視為100 µl),室溫放置15分鐘、或37℃30分鐘、或65℃加熱5-10分鐘使膠塊完全融化。
   注意:應徹底溶解,否則會影響回收效果
4. 吸附 待液體降至室溫(溫度越低,回收效果越好),充分混懸樹脂,全部轉入吸附柱中, 12,000轉/分 離心30秒,棄去離心管中液體。
 
 
5.  漂洗  將700μl的Wash Buffer加入吸附柱Spin Column中,12000rpm離心30-60秒,棄濾液。
6.  再漂洗  將500μl的Wash Buffer加入Spin Column中,12000rpm離心30-60秒,棄濾液。 空柱12000rpm再離心2分鐘,除去殘留乙醇。
7.  洗脫  將Spin Column按置于新的潔凈的1.5ml的離心管上,在吸附柱Spin Column膜的中央處加入50-100μl的水或洗脫緩沖液Elution Buffer,室溫靜置1分鐘,12000rpm離心1分鐘洗脫DNA,可立即用于下游分子生物學實驗或-20℃保存。
    注意:Elution Buffer 組成為2.5mM Tris-HCI (pH8.5),不影響測序和酶切反應,。把水或洗脫液加熱于60℃使用時有利于提高洗脫液效率,如果提取的質粒>10kb,請將洗脫液預熱至60℃,并適當延長洗脫時間。
注意事項:
1.電泳時最好使用新的電泳緩沖液,以免影響電泳和回收效果。
2.如下一步實驗要求較高,則應盡量使用TAE電泳緩沖液。
3.切膠時,紫外照射時間應盡量短,以免對DNA造成損傷。
DNA濃度和純度檢測
   OD260值為1,相當于50ug/ml的雙鏈DNA。也可以通過DNA Marker通過瓊脂糖凝膠電泳半定量。
   OD260/ OD280比值一般為1.7-1.8,如果洗脫時不使用緩沖液,而使用去離子水,由于受PH值和離子濃度的影響,比值會偏低。
 
 
 
 
 
 
常見問題分析及解決方案

可能問題
可能原因
建議解決方法
低DNA 產量
加入太少量的溶膠液
錯誤判斷割下的瓊脂糖凝膠的體積,按照使用說明加入足夠量的溶膠液。
瓊脂糖凝膠不能完全溶解于溶膠液
確保水浴溫度在50℃以令凝膠完全溶解.
TAE 電泳緩沖液不新鮮
使用新鮮配制的緩沖液,這樣不僅可以增加產量,也可防止提取到的DNA 被污染.
柱子堵塞
瓊脂糖凝膠沒有完全溶解在溶膠液
凝膠薄片(>0.3ml) ,我們建議把膠切成更碎的小塊以幫助溶解.
無DNA
漂洗液沒有用無水乙醇稀釋
按照使用說明來準備好漂洗液.
加入的溶膠液體積不適合
對于<200bp的DNA 片斷,加入6 倍體積的溶膠液
OD 值與瓊脂糖凝膠中的DNA產量不相符
從柱子上洗脫下來的痕量雜質增加了A260 的值
確保是按照步驟5和6的方法來洗滌柱子.另一方面,還取決于瓊脂糖/EB電泳的量.
點樣時樣品漂出孔外
在洗滌完之后沒有把柱上的乙醇完全除去
按步驟7 的說明離心柱子以甩干之,然后再進行下面的洗脫步驟.

 

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